StressMarq Biosciences 已開發(fā)出多種不同形式的神經(jīng)退行性疾病相關(guān)蛋白的產(chǎn)品，包括 α-突觸核蛋白、β-突觸核蛋白、γ-突觸核蛋白、Tau、淀粉樣β蛋白、SOD1 和 TTR的預(yù)制原纖維(PFFs)、寡聚體和單體形式的蛋白制劑。StressMarq的目標(biāo)是成為開發(fā)和提供具-有-病理活性的蛋白聚集體的全球領(lǐng)-導(dǎo)者，幫助科學(xué)家構(gòu)建疾病模型，并加速神經(jīng)退行性疾病的藥物研發(fā)。

保存與運(yùn)輸 | 神經(jīng)退行性疾病相關(guān)蛋白

1. 這些蛋白如何運(yùn)輸？

StressMarq 的神經(jīng)退行性疾病相關(guān)蛋白(預(yù)制原纖維PFFs、寡聚體和單體*)均以冷凍形式通過干冰運(yùn)輸。  

*注意: β淀粉樣蛋白單體(貨號: SPR-485)單獨(dú)訂購時(shí)不需要干冰運(yùn)輸。但如果與其他神經(jīng)退行性疾病蛋白一同訂購，則將與其他產(chǎn)品一同采用干冰運(yùn)輸，以節(jié)省運(yùn)輸成本。

2. 這些蛋白如何保存？

詳情請參考網(wǎng)頁:  神經(jīng)退行性疾病相關(guān)蛋白操作指南

這些蛋白如何解凍？

詳情請參考網(wǎng)頁: 神經(jīng)退行性疾病相關(guān)蛋白操作指南

重要事項(xiàng): 預(yù)制原纖維PFFs切勿放置在冰上或4°C環(huán)境中。

3. 100µg規(guī)格的蛋白可以分裝嗎？

如果您不打算立即使用該產(chǎn)品，通常建議在初次解凍后將其分裝為適合您實(shí)驗(yàn)需求的 aliquot(小份量)，然后再進(jìn)行冷凍。首-次分裝后，不建議再次分裝。反復(fù)凍融可能會降低產(chǎn)品的活性。同時(shí)，也不建議對分裝后的樣品進(jìn)行速凍(flash-freeze)。

質(zhì)量控制 | 神經(jīng)退行性疾病相關(guān)蛋白

1. 這些神經(jīng)退行性疾病相關(guān)蛋白的純度是如何測定的？

這些神經(jīng)退行性疾病相關(guān)蛋白的純度是在純化后通過SDS-PAGE進(jìn)行測定的。此外，還會對預(yù)制原纖維(PFFs)進(jìn)行沉降實(shí)驗(yàn)，以評估其中可溶性蛋白的含量，并確定有多少單體蛋白已轉(zhuǎn)化為纖維。

2. 對預(yù)制原纖維(PFFs)進(jìn)行了哪些聚集活性檢測？

我們通過硫磺素T(ThT)檢測法評估α-突觸核蛋白和tau蛋白預(yù)制原纖維(PFFs)的聚集活性。如需了解更多詳情，請參考α突觸核蛋白硫磺素T檢測實(shí)驗(yàn)步驟 或Tau蛋白硫磺素T檢測實(shí)驗(yàn)步驟

3. 這些蛋白產(chǎn)品都進(jìn)行了哪些質(zhì)控(QC)檢測？

對于α-突觸核蛋白和 Tau蛋白預(yù)制原纖維(PFFs):
• 通過 SDS-PAGE檢測純度
• 采用沉降實(shí)驗(yàn)確認(rèn)絕大部分單體已轉(zhuǎn)化為纖維
• 以硫磺素 T(Thioflavin T)檢測聚集活性
• 通過原子力顯微鏡(AFM)或透射電子顯微鏡(TEM)驗(yàn)證結(jié)構(gòu)
• 標(biāo)準(zhǔn) QC 流程還包括內(nèi)毒素檢測和無菌檢測

β淀粉樣蛋白寡聚體和預(yù)制原纖維PFFs:
• 使用β淀粉樣蛋白抗體(6E10)進(jìn)行 Western Blot，確認(rèn)寡聚體/纖維形態(tài)。
• 通過原子力顯微鏡(AFM)或透射電子顯微鏡(TEM)驗(yàn)證結(jié)構(gòu)。
• 標(biāo)準(zhǔn) QC 流程同樣包括內(nèi)毒素檢測和無菌檢測。

實(shí)驗(yàn)步驟｜神經(jīng)退行性疾病相關(guān)蛋白

1. 我該如何決定在我的實(shí)驗(yàn)中使用哪種預(yù)制原纖維(PFFs)？

建議您瀏覽“神經(jīng)退行性疾病相關(guān)蛋白 "的頁面，來了解 StressMarq 提供的各類產(chǎn)品。頁面還附有實(shí)驗(yàn)步驟, 操作指南 以及常見問題解答，供您參考。

如您需要我們協(xié)助您挑選產(chǎn)品，請發(fā)送郵件至我們欣博盛生物，并注明您的實(shí)驗(yàn)條件與研究目標(biāo)，我們將盡力為您推薦合適的產(chǎn)品。

2. 是否有使用PFFs時(shí)的超聲處理(sonication)方案可供參考？

超聲儀有多種類型和型號(如水浴式、探頭式等)。由于不同實(shí)驗(yàn)室或研究人員可能使用不同種類或型號的超聲儀，我們建議您參考我們網(wǎng)站上的“超聲處理方案"頁面中的信息: 超聲處理實(shí)驗(yàn)步驟 ，研究人員始終需要根據(jù)自己的具體實(shí)驗(yàn)、實(shí)驗(yàn)室條件和所使用的超聲儀對方案進(jìn)行優(yōu)化。

3. 我在哪里可以找到這些蛋白的相關(guān)實(shí)驗(yàn)方案？

請參考我們的 神經(jīng)退行性疾病相關(guān)蛋白實(shí)驗(yàn)步驟頁面，該頁面包含了硫黃素T(ThT)實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞培養(yǎng)、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)等相關(guān)的實(shí)驗(yàn)方案。

4. 這些蛋白的濃度是多少？我該如何計(jì)算摩爾濃度？

α-突觸核蛋白和tau蛋白的標(biāo)準(zhǔn)濃度為2 mg/mL，β淀粉樣蛋白的標(biāo)準(zhǔn)濃度為1 mg/mL。部分α-突觸核蛋白和tau蛋白也提供5 mg/mL的濃度(詳見各產(chǎn)品詳情頁的訂購信息)。

如需計(jì)算摩爾濃度，請使用單體分子量(MW)并按以下公式計(jì)算：μM = (μg/L) / (MW，單位為Da)

我們使用單體的分子量進(jìn)行計(jì)算，因?yàn)殡y以確定每個(gè)纖維(fibril)中包含多少個(gè)單體，因此無法準(zhǔn)確計(jì)算其具體質(zhì)量

產(chǎn)品引用｜神經(jīng)退行性疾病相關(guān)蛋白

1. 這些蛋白是否有在科學(xué)文獻(xiàn)中被引用過？

是的，StressMarq 的神經(jīng)退行性疾病相關(guān)蛋白經(jīng)常被科學(xué)期刊引用。如需查看某款產(chǎn)品的具體引用文獻(xiàn)，請?jiān)谠摦a(chǎn)品的詳情頁“Product Citations(產(chǎn)品引用)"欄中查找。例如，α-突觸核蛋白PFFs(Alpha Synuclein Pre-formed Fibrils，目錄號 SPR-322)的引用信息可參見:  α突觸核蛋白預(yù)制原纖維(貨號SPR-322)引用文獻(xiàn).

您也可以通過以下鏈接查看StressMarq所有神經(jīng)退行性疾病蛋白的完整引用列表:   神經(jīng)退行性疾病相關(guān)蛋白引用文獻(xiàn)

如您只想查看每種神經(jīng)退行性疾病相關(guān)蛋白的最新引用信息，請參考以下頁面: α突觸核蛋白, Tau蛋白, β淀粉樣蛋白

FAQs | α-突觸核蛋白

1. 使用α-突觸核蛋白預(yù)制原纖維(alpha synuclein PFFs)時(shí)，應(yīng)該選擇什么作為對照？

合適的對照取決于所進(jìn)行的具體實(shí)驗(yàn)。通常建議使用制備PFFs所用的起始單體作為對照。例如，可以使用目錄號 #SPR-321(單體)作為目錄號 #SPR-322(PFFs)的單體對照。每種PFFs所對應(yīng)的單體來源均可在產(chǎn)品頁面的“其他相關(guān)信息(Other Relevant Information)"欄中找到。

此外，β-突觸核蛋白PFFs也可以作為α-突觸核蛋白PFFs的對照，因?yàn)樗鼈兙邆渚奂钚浴?/p>

2. 我可以使用小鼠α-突觸核蛋白PFFs在人源iPSC神經(jīng)元中誘導(dǎo)pSer129病理改變嗎？這些PFFs能否在不同物種間有效引發(fā)病理種子聚集效應(yīng)？

我們的人源α-突觸核蛋白PFFs(目錄號 SPR-322)已被證實(shí)可在人源iPSC神經(jīng)元中誘導(dǎo)產(chǎn)生pSer129病理改變。而小鼠源α-突觸核蛋白PFFs(目錄號 SPR-324)在體外硫黃素T(Thioflavin T)檢測中似乎不能很好地誘導(dǎo)人源單體蛋白發(fā)生聚集，盡管兩者具有相似的同源性。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道(Luk et al. 2016)，人和小鼠α-突觸核蛋白之間的交叉聚集效率低于同源聚集。

3. α-突觸核蛋白單體會自發(fā)形成纖維嗎？

為防止發(fā)生自發(fā)纖維化，我們建議在解凍和使用過程中將單體蛋白保持在冰上。即使確實(shí)發(fā)生了自發(fā)纖維化，所產(chǎn)生的聚集物的量也會非常少，因?yàn)棣?突觸核蛋白的聚集通常需要振蕩或攪動等外界刺激。

4. α-突觸核蛋白PFFs是否已在嚙齒類動物中進(jìn)行過注射？

我們的人源α-突觸核蛋白PFFs(目錄號 SPR-322)和小鼠源α-突觸核蛋白PFFs(目錄號 SPR-324)能夠誘導(dǎo)內(nèi)源性α-突觸核蛋白發(fā)生病理改變，并已在小鼠和大鼠中成功進(jìn)行注射，誘導(dǎo)出從注射部位向外擴(kuò)散的α-突觸核蛋白病理特征。相關(guān)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和圖片可在產(chǎn)品頁面中查看。

FAQs | β淀粉樣蛋白(Aβ)

1. β淀粉樣蛋白(Aβ)纖維和寡聚體的穩(wěn)定性如何？

在室溫下，Aβ 纖維在經(jīng)歷一次凍融循環(huán)后仍相當(dāng)穩(wěn)定，并在酸性緩沖液中可保存數(shù)周；Aβ 寡聚體同樣可耐受一次凍融，且在體積排阻層析(size-exclusion chromatography)過程中保持其分子大小不變。

2. Aβ 纖維和寡聚體在使用前是否需要進(jìn)行超聲處理？

Aβ纖維在實(shí)驗(yàn)前需要進(jìn)行超聲處理。盡管它們在酸性緩沖液中可溶，但在接觸到中性緩沖液后容易發(fā)生聚集并變得不溶。因此，我們建議在實(shí)驗(yàn)使用前立即進(jìn)行超聲處理。

Aβ寡聚體不需要超聲處理。

3. 未聚集的單體是否已從Aβ寡聚體和原纖維中去除？還是其中仍然存在聚集體與單體的混合物？從產(chǎn)品頁面所示的WB(Western Blot)圖來看，兩種產(chǎn)品中都存在單體/二聚體條帶。

這些是處于平衡狀態(tài)的無序蛋白。遺憾的是，無法從寡聚體和纖維體的制備物中完-全去除單體，因?yàn)閱误w在過濾過程中很容易發(fā)生聚集。因此，這些制備物中很可能仍然殘留有一些單體，而且由于SDS會將聚集物分解為單體，因此很難準(zhǔn)確量化其中的單體含量。不過，我們在網(wǎng)站上展示的Western blot圖像顯示了單體、寡聚體和纖維體制備物在相同濃度下電泳的結(jié)果，在寡聚體和纖維體樣品中，即使存在SDS(它會將聚集物分解為單體)，單體的信號也還不到5%。

FAQs | Tau蛋白

1. 請問你們提供的 Tau 蛋白是否有體內(nèi)(in vivo)驗(yàn)證數(shù)據(jù)？"

Tau(K18)P301L 突變型 PFFs(貨號: SPR-330)已證實(shí)可在注射后九周內(nèi)在 P301L 小鼠海馬中誘導(dǎo) Tau 蛋白的磷酸化與聚集。有關(guān)實(shí)驗(yàn)的更多細(xì)節(jié)請參見產(chǎn)品頁面。

2. 請問你們提供超磷酸化的 Tau 蛋白嗎？

是的，我們提供多種在桿狀病毒/Sf9系統(tǒng)中表達(dá)的高度磷酸化Tau單體和纖維。這些產(chǎn)品包括: 野生型Tau單體(貨號: SPR-496)和PFFs(貨號: SPR-498)，以及Tau P301S突變型單體(貨號: SPR-473)和PFFs(貨號: SPR-471)。質(zhì)譜分析顯示，桿狀病毒表達(dá)的野生型Tau最多可達(dá)到20個(gè)磷酸化位點(diǎn)，而P301S突變型Tau的磷酸化位點(diǎn)可達(dá)38個(gè)。此外，我們還提供在CHO細(xì)胞中表達(dá)的、具有N-糖基化和高度磷酸化修飾的Tau P301S突變型單體(貨號: SPR-515)和PFFs(貨號: SPR-516)。

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